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產(chǎn)品簡介
本產(chǎn)品紅細(xì)胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer,或稱ACK Lysis Buffer),是一種經(jīng)典的用于去除紅細(xì)胞的裂解液,在不損傷有核細(xì)胞的前提下充分去除紅細(xì)胞。經(jīng)紅細(xì)胞裂解液裂解得到的組織細(xì)胞中不含紅細(xì)胞,可進(jìn)一步用于原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、流式細(xì)胞分析、核酸與蛋白的分離及提取等。其基本原理是利用細(xì)胞內(nèi)滲透壓濃度差而導(dǎo)致細(xì)胞膜脹破的原理裂解紅細(xì)胞。主要成分包含氯化銨、碳酸氫鉀、EDTA-Na2。因銨根離子無法通過細(xì)胞膜,而其他離子可以通過,造成細(xì)胞內(nèi)外的離子濃度差異,外部水分?jǐn)U散至細(xì)胞內(nèi),使紅細(xì)胞膨脹,達(dá)到裂解效果。本產(chǎn)品經(jīng)0.2 μm濾膜過濾除菌。
儲存與運(yùn)輸
冰袋(wet ice)運(yùn)輸;4℃保存,有效期12個月。
使用方法
組織細(xì)胞樣品:
1. 新鮮組織經(jīng)胰酶或膠原酶等消化分散成單個細(xì)胞懸液,離心棄去上清液;
2. 按1:3-5比例向細(xì)胞沉淀中加入紅細(xì)胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2 min;
3. 800-1000 rpm離心5-8 min,離心棄去上層紅色清液;
4. 收集沉淀部分,加入Hank’s液或無血清培養(yǎng)液離心洗2-3次;
5. 如裂解不完全可重復(fù)步驟2和3;
6. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn);如提取RNA,最好是于步驟4開始使用DEPC水配制的溶液。
血細(xì)胞:
1. 新鮮抗凝血,離心棄去上清液;
2. 按1:6-10比例向細(xì)胞沉淀中加入紅細(xì)胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-5 min;
3. 800-1000 rpm離心5-8 min,離心棄去上層紅色清液;
4. 收集沉淀部分,加入Hank’s液或無血清培養(yǎng)液離心洗2-3次;
5. 如裂解不完全可重復(fù)步驟2和3;
6. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn);如提取RNA,最好是于步驟4開始使用DEPC水配制的溶液進(jìn)行。
注意事項
1. 本品經(jīng)過濾除菌,使用時請注意無菌操作,避免細(xì)菌污染。
2. 后續(xù)試驗(yàn)如是用于細(xì)胞培養(yǎng),操作過程中應(yīng)注意在超凈工作臺中完成,并注意無菌操作,以免細(xì)胞被污染,影響細(xì)胞培養(yǎng)。
3. 在離心洗滌后,如發(fā)現(xiàn)極微量的紅細(xì)胞,可繼續(xù)試驗(yàn),不會影響后續(xù)檢測。
4. 操作時請穿實(shí)驗(yàn)服,佩戴一次性手套。
本產(chǎn)品僅供科研用途,不用于臨床診斷!
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