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產品詳情
操作說明
注意事項
產品信息
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產品名稱 |
產品編號 |
規(guī)格 |
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高純度質粒DNA小量提取試劑盒 |
M0k942132 |
100T |
產品簡介
本試劑盒采用改良的SDS-堿裂解法，優(yōu)化的裂解液可以使得離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結合溶液中的DNA，結合先進的硅膠膜吸附技術，可達到快速純化質粒DNA的目的。適用于從1-5 mL的細菌培養(yǎng)物中提取多至25 μg高純度的質粒DNA。本試劑盒可去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。質粒提取得率和質量與宿主菌的種類和培養(yǎng)條件，細胞的裂解，質?？截悢?shù)，質粒的穩(wěn)定性，抗生素等因素有關。溶液包含指示劑，通過其顏色的變化，指示重懸、裂解、中和是否完全，從而保證質粒提取的質量，實現(xiàn)可視化的操作流程。使用本試劑盒提取的質粒DNA可適用于轉染多種細胞及各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測序、連接、轉化、文庫篩選、體外翻譯等。
儲存與運輸
常溫運輸；常溫干燥保存，有效期12個月。其中RNase A在室溫可穩(wěn)定保存12個月以上，加入到Buffer S1 (Red)中以后4℃保存。
使用前須知（請仔細閱讀）
1. 使用前請先檢查Buffer BL、Buffer S2、S3、PD是否出現(xiàn)渾濁，如有混濁現(xiàn)象，可在37℃水浴中加熱數(shù)分鐘，即可恢復澄清。
2. Buffer S1在使用前先加入全部的RNase A并混勻，置于2-8℃保存。
3. Buffer PW使用前請先檢查是否加入指定量的無水乙醇。
4. 柱平衡步驟中Buffer BL的加入能夠改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和穩(wěn)定性，消除高溫、潮濕或其他不良環(huán)境因素對吸附柱造成的影響。
操作步驟
1. （可選步驟）柱平衡：將吸附柱（Bind DNA Mini Columns）置入收集管（Collection Tubes）中，向吸附柱中加入500 μL溶液Buffer BL，10,000 g離心1 min，去除收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中（請使用當天處理過的柱子）；
2. 細菌收集：取1-5 mL過夜培養(yǎng)的新鮮菌液加入離心管中，10,000 g離心1 min，盡量吸除上清（菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中）；
3. 重懸：向留有菌體沉淀的離心管中加入250 μL溶液Buffer S1（使用前請先檢查瓶中是否已加入RNase A），使用移液器或渦旋振蕩器徹底重懸菌體沉淀，混勻后的溶液為渾濁的紅色，室溫靜置5 min（注意：如果有未徹底混勻的菌塊，會影響裂解，導致提取量和純度偏低）；
4. 裂解：向離心管中加入250 μL溶液Buffer S2，溫和地上下翻轉6-8次使菌體充分裂解（注意：溫和混合，不要劇烈震蕩；此時菌液應變得清亮粘稠，如果未變清亮，可能由于菌體過多，裂解不徹底，應減少菌體量。添加Buffer S2徹底混勻后，溶液顏色為澄清的紫色；如紫色中混雜有渾濁的紅色，則說明裂解不充分，繼續(xù)混勻直至溶液顏色完全變?yōu)槌吻宓淖仙?；裂解建議室溫不超過5 min）；
5. 中和：向離心管中加入350 μL溶液Buffer S3，立即快速地上下顛倒混勻6-8次，充分混勻，此時將出現(xiàn)絮狀沉淀，13,000 g離心10-15 min（注意：加入溶液Buffer S3后應立即混合，上清中含有少量微小白色沉淀對后續(xù)實驗沒有影響；如上清中存在大量微小白色沉淀，可再次離心后取上清；添加Buffer S3徹底混勻后，溶液為澄清的黃色，如在黃色中混有紫色，則說明復性不充分，繼續(xù)混勻至溶液顏色完全變?yōu)槌吻宓狞S色）；將收集的上清液轉移至吸附柱中，注意盡量不要吸取沉淀，10,000 g離心1 min，棄去收集管中的廢液，將吸附柱放入收集管中；
6. 向吸附柱中加入500 μL溶液Buffer PD，10,000 g離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放入收集管中；
7. 向吸附柱中加入700 μL溶液Buffer PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），10,000 g離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放入收集管中（注意：如果回收的DNA是用于鹽敏感的實驗，例如平末端連接實驗或直接測序，建議Buffer PW加入后靜置2-5 min再離心）；
8. 重復操作步驟7；
9. 將吸附柱放入收集管中，10,000 g離心2 min，盡量除去殘留的液體；將吸附柱置于室溫放置5 min，徹底晾干（注意：漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶切、PCR等實驗）；
10. 將吸附柱放入一個干凈離心管中，向吸附中的膜中間位置懸空滴加50~100μL Elution Buffer或ddH2O（60-65℃預熱Elution Buffer或ddH2O后再使用效果更好），室溫放置2 min，10,000 g離心2 min，收集DNA溶液（注意：洗脫液的體積不應少于50 μL，體積過少會影響回收的效率。為了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重新加回離心吸附柱中，室溫放置2 min，10,000 g離心2 min，將DNA溶液收集到離心管中。洗脫液的pH值對于洗脫效率有較大影響。若后續(xù)做測序，建議使用ddH2O做洗脫液，并保證其pH值在7.0-8.5范圍內，pH值低于7.0會降低洗脫效率；DNA產物應保存在-20℃，以防DNA降解）。
注意事項
1. 提取的質粒量與細菌培養(yǎng)濃度、質?？截悢?shù)等因素有關。如果所提質粒為低拷貝質?；虼笥?0 kb的大質粒，應加大菌體使用量，使用5-10 mL過夜培養(yǎng)物，同時按照比例增加Buffer S1、S2、S3的用量，Elution Buffer應在60-65℃水浴預熱，在吸附和洗脫時可以適當?shù)难娱L時間，以提取效率。其它步驟相同。
2. 各溶液使用后請及時將蓋子擰緊，防止溶劑揮發(fā)。
3. 操作時請穿實驗服，并佩戴一次性手套。
產品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
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