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細胞劃痕實驗
來源：萬物生物 發(fā)布時間：2021-11-02
細胞劃痕實驗
一、實驗簡介
細胞劃痕（修復(fù)）法是一種簡捷的測定細胞遷移運動與修復(fù)能力的方法，類似體外傷口愈合模型。在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細胞上，用微量頭或其他硬物在細胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央的細胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細胞至設(shè)定時間（采用無血清或低血清（<2%）排除細胞增殖的影響），取出培養(yǎng)板，觀察周邊細胞是否生長（修復(fù)）至中央劃痕區(qū)，以此判斷細胞的生長遷移能力。通常設(shè)定正常對照組與實驗組，實驗組中添加某些處理因素或藥物、外源性基因等，通過不同分組之間的細胞對于劃痕區(qū)的修復(fù)能力，判斷比較各組細胞的遷移與修復(fù)能力。
二、細胞劃痕實驗步驟
(1) 先用marker筆在6孔板背后，用直尺比著，均勻的劃橫線，大約每隔0.5~1cm一道，橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。
(2) 在孔中加入約5×105個細胞，培養(yǎng)細胞至匯合度達到90%以上。
(3) 用頭比著直尺，垂直于背后的橫線劃痕。
(4) PBS洗細胞3次，去除劃下的細胞，加入無血清培養(yǎng)基。
(5) 放入37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。按0，12，24，48h時間點取樣，100倍鏡下拍照。如果細胞遷移（修復(fù)）能力較強，需相應(yīng)縮短觀察時間間隔。
(6) 結(jié)果分析：對不同時間點不同處理分組的劃痕間距進行分析。
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標書基金實驗咨詢 表觀遺傳組學(xué)分析
課題實驗結(jié)題指導(dǎo) 細胞分子功能驗證
實驗培訓(xùn)文章潤色 動物模型裸鼠成瘤
臨床檢測科研轉(zhuǎn)化 病理染色分子互作